骨形态发生蛋白 4 调节人牙髓干细胞在脱细胞的牙髓基质中促进成骨/成血管分化的研究
谭沁 1，2，曹钰莹 1，2，王金华 1，2*
1.重庆医科大学附属口腔医院，重庆，401147；2.口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室，重庆，401147
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摘要：
目的 探究骨形态发生蛋白 4（BMP4）与脱细胞人牙髓细胞外基质是否共同调节人牙髓干细胞（hDPSCs）介导的成骨/成血管分化。方法 从健康的人第三磨牙中分离出牙髓，改良组织块法培养 hDPSCs 并进行鉴定，用十二烷基硫酸钠（SDS）和 Triton X-100 制作脱细胞化细胞外基质（dECM），电子显微镜观察其结构，Cell Counting Kit-8 分析细胞增殖生长曲线。使用重组腺病毒 BMP4 感染 hDPSCs。HE 和 DAPI 染色后，当看不到完整的细胞核时，分别在 dECM 和三维（3D）VitroGel 系统中培养细胞，并通过碱性磷酸酶染色（ALP）与实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）评估骨/牙本质/血管生成标记的表达。结果 提取 hDPSCs 并完成鉴定，制作脱细胞牙髓细胞外基质并于镜下观察无细胞核存在。CellCounting Kit-8 分析结果表明，dECM 可以支持 hDPSCs 的生长和增殖且没有明显的细胞毒性。ALP 染色结果显示，BMP4 和 dECM 协同促进 hDPSCs 成骨分化。qRT-PCR 结果显示，成骨和成血管细胞基因的表达增加。结论 dECM 可促进 hDPSCs 增殖，而 BMP4+dECM 促进 hDPSCs 在体外成骨和成血管分化。